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樂楓純水為您解讀實時熒光定量PCR實驗用水
點擊次數(shù):3372 更新時間:2020-02-28

文章要點:上海樂楓市場部對目前疫情防控工作中的熒光定量PCR的核酸檢測技術做了深入淺出地闡述,并為該實驗中使用的純水設備做了解析和介紹。

轉(zhuǎn)載請注明原文出處
 

目前疫情的防控工作取得了階段性的成效,基于實時熒光定量PCR的核酸檢測技術在新冠病毒快速鑒定及確診中發(fā)揮了重要作用。
 

什么是實時熒光定量PCR?
 

實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技術,簡稱qPCR,是在PCR反應體系中加入熒光物質(zhì)(熒光染料或熒光標記的特異性探針),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 


與普通PCR相比,實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍。運用該項技術,可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、定量和定性分析。


實驗流程:


在實時熒光定量PCR實驗中,可以分為樣本采集,RNA提取,RNA質(zhì)量鑒定,反轉(zhuǎn)錄及數(shù)據(jù)分析幾個步驟,在進行引物、模板的稀釋,試劑的配制和補足反應體系時都會用到水,水質(zhì)量的好壞直接影響終數(shù)據(jù)分析的結果。
 

水中的顆粒物,離子含量,有機物及細菌微生物等雜質(zhì)對實驗都會帶來影響,zui值得關注的因素有以下兩個方面:
 

1. DNA酶和RNA酶

DNA酶和RNA酶能夠特異性地降解DNA和RNA。在進行實時熒光定量PCR時,去除這兩種酶從而保證提取的RNA和DNA樣本的完整性十分關鍵。尤其在提取RNA的時候,RNA極易被降解。這是因為RNase非常穩(wěn)定,且無處不在,用常規(guī)的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑制劑不能使所有的RNase*失活。如果樣本中的核酸被降解,會影響檢測結果的準確性,甚至造成假陰性檢測結果。

因此,實時熒光定量PCR實驗用超純水必須有效降低DNA酶和RNA酶的含量,減少對實驗的影響。
 

2. 鎂離子

實時熒光定量PCR實驗需要根據(jù)不同的引物對和模板確定zuijia的鎂離子濃度。

Mg2+濃度過低,會影響DNA聚合酶的活性,導致產(chǎn)量降低,影響實時定量的敏感性;

Mg2+濃度過高,會增加引物二聚體的形成,這會影響特異性。

因此,實時熒光定量PCR實驗用超純水必須控制Mg2+濃度,避免背景因素帶來的不確定性。

 

綜上,實時熒光定量PCR實驗推薦使用超純水,水質(zhì)要求如下圖所示:
 

 

純水儀器選型推薦:
 

根據(jù)上述的分析和用水指標,可以采用樂楓的Genie G一體超純水機和Genie PURIST超純水機,這兩種純水設備都可以滿足實時熒光定量PCR反應的用水要求。
 


南科大安裝的 Genie G
 

GenieG和Genie PURIST純水設備是上海樂楓RephiLe為e 時代的實驗室純水需求開發(fā)的智能型實驗室純水系統(tǒng)。
采用了無線技術,主機、主控屏和手柄之間采用無線連接,按需隨意放置。
耗材/ 零部件實現(xiàn)了可全程追溯,quan方位監(jiān)控的要求,防水的控制屏可帶手套操作。
Genie純水儀設計緊湊,體積小,可掛墻,可置于臺盆下,方便用戶合理利用空間。

其中,GenieG采用了EDI模塊,可從自來水制備超純水和EDI純水,為實驗不同需要帶來方便。Genie PURIST則是從純水制備超純水的一款儀器,安裝使用非常方便。

 

該兩款設備還有兩個很重要的優(yōu)勢可以適用于qPCR實驗:

? Genie系列超純水機,可以配置樂楓RephiLe配方填料的低鎂型純化柱,不但可以廣譜去除水中的金屬離子,還可以特異性去除水中的鎂離子,保證超純水中Mg2+對qPCR實驗零干擾。這種低鎂型純化柱是樂楓dujia提供,專為PCR和測序?qū)嶒炑芯块_發(fā)的產(chǎn)品。

? 裝有帶電荷尼龍膜的RephiBio終端濾器。 RephiBio可以除DNA酶和RNA酶,避免核酸酶對實驗的影響。

配備了低鎂型純化柱和RephiBio,GenieG和GeniePURIST可以為你的熒光定量PCR反應保駕護航。


中科大安裝的 Genie PURIST
 

Genie系列純水機水質(zhì)穩(wěn)定,品質(zhì)高,而且有數(shù)據(jù)保證:水質(zhì)已經(jīng)通過第三方省級以上檢測機構的檢測;RephiBio終端過濾器,也具有國外實驗室熱源、DNase和RNase的檢測報告。使用Genie系列超純水機,可以確保超純水對qPCR反應的不確定性降至低,讓用戶“用水無憂”,享受的體驗。

 

關鍵詞:新冠肺炎,純水, qPCR, 聚合酶鏈式反應, Taq酶, 上海樂楓, RephiLe, Genie 純水機, Super-Genie 純水機

上海樂楓生物科技有限公司

上海樂楓(Rephile Bioscience,Ltd.) 是一家專業(yè)從事水純化和實驗室分離純化產(chǎn)品研發(fā)、設計和制造的企業(yè),為高科技生物技術和生命科學領域的用戶服務。樂楓公司著眼于發(fā)展,在中國、美國、法國、印度、南非等近20個國家建立了銷售機構,同時也為大型公司提供OEM和ODM,產(chǎn)品銷往包括歐美的近100個國家。成立十余年,樂楓持續(xù)投入研發(fā),創(chuàng)立出了自己的產(chǎn)品品牌RephiLe(瑞楓),推出了多個新概念產(chǎn)品- 無線連接的Genie系列純水系統(tǒng)和智能型大流量純水工作站Super-Genie等。目前樂楓純化柱填料配方齊全,也提供多款密理博純水系統(tǒng)的兼容耗材。

關注RephiLe 企業(yè)微信:樂楓純水,關注樂楓動態(tài)!

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